PCR 引物与标准重组酶聚合酶扩增试剂结合使用

在 TwistDx,我们不断努力以求进一步改善 RPA,并挖掘该反应的新功能和特点。我们现已证实,在某些情况下,采用已确定的短至 18 个残基且无需额外优化的寡核苷酸 PCR 引物进行 RPA 非常有效。至今为止,我们发现 PCR 引物可生产最长达到 500 个碱基对的扩增子,但对于基于凝胶的检测,孵育时间视引物长度和扩增子大小而定。

Using PCR primers with RPA

为了确保最佳的反应,我们仍然建议 RPA 用户设计长度为 30-35 个核甘酸的较长引物,但客户也可对特定的靶序列尝试在 RPA 中采用经验证的 PCR 引物。我们期待获知 PCR 引物有效的新实例。

下面是一些使用公开 PCR 引物和 103 拷贝靶标(主要为基因组 DNA)建立 RPA 反应的示例。

引物序列
C. t1 TCTTTTTAAACCTCCGGAACCCACTT/GGATGGCATCGCATAGCATTCTTTG
C. t2 GGACAAATCGTATCTCGG/GAAACCAACTCTACGCTG
C. t3 TGATGCTAGGGACGGATTAAAACC/TTCCCCTAAATTATGCGGTGGAA
H. s1 CGTGTACTTGATCGTCGCCAT/CAAGGAGGAAGGCTAGGGCTA
H. s2 GTGCTGTTTGCAGCTCTGAG/AGTGGCCAAGGAGTCGTATG
N. g1 CCGGAACTGGTTTCATCTGATT/GTTTCAGCGGCAGCATTCA
N. g2 GCTACGCATACCCGCGTTGC/CGAAGACCTTCGAGCAGACA
T. v ATTGTCGAACATTGGTCTTACCCTC/TCTGTGCCGTCTTCAAGTATGC

参考文献:
C. t1 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3854900/
C. t2 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC269699/
C. t3 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2944303/
H. s1 http://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/[SK2] 
H. s2 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12209956
N. g1 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1876173/
N. g2 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC495310/
T. v http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC87441/