植物病原体

英国的研究者正在利用 TwistDx 的 TwistAmp® exo RT 试剂盒开发快速实地诊断工具,用于帮助西非农民确保该地区最重要的主要粮食作物山药在繁殖过程中不会感染山药嵌纹病毒 (YMV) 这一对经济影响最大的病毒性病害。

在比尔及梅琳达·盖茨基金会的资助下,Gonçalo Silva、Susan Seal 与英国格林威治大学自然资源研究所 (NRI) 的同僚共同开发出一项 RT-exoRPA 检测技术。该技术尚属原型阶段,已在评估试验中用于从提取自山药的总 RNA 以及山药粗提液中检测 YMV1

0:00 / 0:00

在最适宜的 37˚C 温度下,此 RT-exo RPA 检测方法表现出与 RT-PCR 一样的灵敏度,检出限为每微升 14 pg(纯化 RNA),并且只需 30 分钟即可出结果。相比之下,RT-PCR 检测方法需要 150 分钟才能达到相同的检测灵敏度。Silva 博士评价道:“RTexoRPA 检测法也比抗体法测试灵敏,抗体法测试通常需要高度感染。我们使用 TwistDx exo 试剂盒设计的封闭式系统消除了污染问题,并实时显示荧光检测结果。而且,此 37˚C 的工作温度低于 LAMP(环介导等温扩增法)等其他恒温方法所需的温度。令人鼓舞的是,RPA 检测方法在 30˚C 这一很典型的西非室温下运行良好,虽然速度较慢且灵敏度略低,因此该测试无需任何加热即可实行。”

NRI 团队正在努力将 RPA 法转化成可由农民、繁殖中心和认证实验室用于实地验证无性繁殖种子山药库存未感染 YMV 的工具。在其发表的论文中,研究者展望将来应用电池供电的便携式设备为反应加热,并在 37˚C 这一最适宜的工作温度下读取 RPA 荧光检测结果。Seal 教授说道:“我们目前正在微流体设备以及横向流动形式中评估荧光法测试。RPA 技术对于我们来说非常重要,我们希望在需要最少器材和操作步骤且有助于增加此西非关键食用和经济作物产量的前提下,利用这一技术来开发快速、灵敏且易用的检测方法。”

查看完整的出版物

1.Rapid and specific detection of Yam mosaic virus by reverse-transcription recombinase polymerase amplificationSilva G, Bömer M, Nkere C, Kumar PL, Seal SE