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撤回 TwistAmp® 试剂盒的 RT 系列。我还可以使用 RPA 扩增 RNA 模板吗?

只需在构建反应时加入合适的逆转录酶 (RT),就可以使用 TwistAmp® 试剂盒来扩增 RNA 模板。TwistAmp® exo 试剂盒与 TwistAmp® exo RT 试剂盒的唯一区别是 TwistAmp® exo RT 试剂盒在冻干反应微球中添加了 M-MLV RT。如果将适合在 37-42°C 下工作的 RT 添加到 RPA 化学过程中,则可以一步完成 RNA 的逆转录以及 cDNA 的产生和扩增。互补的 DNA 序列便是添加的 RNA 的序列。根据您所选制造商的说明,我们建议使用与相同体积的 PCR 反应相似的 RT 量。我们还建议您在 40°C 下运行反应,并将反应液搅拌时间点延迟一分钟以让 RT 充分起效,而在其他方面您只需按照正常的 TwistAmp® 反应来运行本反应(这是一步过程)。在任何以 RNA 为靶标材料的反应中最好加入 RNase 抑制剂。

撤回设备(TwirlaT8 T16)。我用什么来孵育 RPA 反应?我如何实检测荧光?

直接联系 Axxin 仍可获得 T8 和 T16 设备,联系方式:sales@axxin.com 或 www.axxin.com。对于终点检测方法,可以使用任何能够将温度稳定于 37-42℃ 之间的孵育器。可在现有的各种孵育荧光计上,或者在任何能激发和检测所选荧光团并能将温度稳定于37-42°C 的酶标仪或实时热循环仪上,执行 RPA 实时荧光检测。如果设备与 0.2 mL 反应管不匹配,则将反应液转移至合适的反应容器(例如多孔板),并根据设备要求对样本进行孵育/监测。此外,应根据实验方案来调整振荡混匀方案。反应的荧光读取频率可由用户确定(通常为每 20-30 秒)。使用热循环仪时,您可能需要更换提供的反应管管盖,即换掉圆顶管盖。许多荧光计从底部向上读取荧光或从侧面读取荧光。但是,如果您的热循环仪是从管上方读取荧光,则可能需要平盖。热循环仪通常有加热盖(通常已设定温度,且用户无法调节),某些型号上的加热盖可以关闭加热。设定的温度对于 RPA 来说通常过高,可能会影响酶的效率。加热盖用于防止 PCR 反应液蒸发并冷凝于盖子上,但 RPA 反应迅速并且是在低温下进行,因此不存在这种问题。我们建议尽可能关闭加热盖的加热功能。

撤回 TwistAmp® fpg 试剂盒。我的替代方案是什么?我还可以做实时 RPA 吗?

TwistAmp® exo 和 fpg 试剂盒均可通过读取荧光探针信号来实时检测扩增子。一般而言,TwistAmp® exo 的探针切割动力学速度更快,因此荧光累积的速度往往更快。如果您想要测定终点扩增产物,我们建议您将 TwistAmp® nfo 试剂盒与 exo 探针结合使用,因为 nfo 核酸酶将成功切割探针,但不会减少扩增材料的最终总产量,相比之下若使用 TwistAmp® exo 试剂盒,则无法测量终点 exo 反应产物,因为在扩增停止后,反应混合液中的核酸外切酶会消化大部分的扩增产物。

撤回即用型试剂盒系列(TwistAmp® exo +CampylobacterTwistAmp® exo +ListeriaTwistFlow® Salmonella TwistGlow® Salmonella)。我不想开发自己的分析方法,我只想试着将 RPA 整合到我的应用或方法中。

TwistDx 继续单独销售 TwistAmp® exo 阳性对照模板和寡核苷酸,为客户测试提供现成的分析方法。

如您有任何疑问,或需了解更多信息,请随时联系我们的客户支持团队:techsupport@twistdx.co.uk。