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TwistDx:科学、机缘与成功之路

by 12月 19, 2017
Olaf Piepenburg 

2017 12 19

TwistDx CSO,Olaf Piepenburg 博士

科学研究的好奇之处是你永远不知道它将带你走向何方。TwistDx 成立于 18 年前,当时它称为 ASM Scientific,我们没有预料到我们会在 2017 年成为 RPA 应用的先驱者。好的创意、境遇与反复试验使我们取得了如此辉煌的成就,并无疑将继续造就我们未来的成功。

改变目标

很多人都不知道,TwistDx 在成立之初的目标是探索单分子测序创意,而非 DNA 扩增和检测。其中一项任务是找到一种机制,在靶 DNA 的小片段中构建明确的末端以作为酶测序复合物装配的位点。这种复杂的挑战使我们萌发了将人造寡核苷酸和重组蛋白混合使用的想法,我们很快发现,如果我们在靶 DNA 上使用方向相反的两种寡核苷酸引物,我们可以构建指数扩增的机制。

模仿大自然

早在 2003 年,单分子测序市场就被大公司和投资者完全占领,我们决定专注于研究 RPA 和 DNA 扩增。我们成功的关键是模仿 T4 样噬菌体中的重组系统,该系统由三种蛋白组成:一种称为紫外线敏感 X (uvsX) 的重组酶、Gp32(一种单链 DNA 结合蛋白)和另一种称为 uvsY 的小肽。几十年前,这些蛋白质作为诱变屏障的一部分被发现,我们开始研究它们的时候它们已被充分表征。但是没有人像我们计划的那样使用它们。

缺少的成分

试图重塑重组系统并将其与链置换性 DNA 聚合酶相结合需要进行大量反复试验,一项突破性举措是加入某些添加剂,例如拥挤试剂聚乙二醇 (PEG)。我们推断拥挤试剂会提高活性成分的局部浓度,对重组和引物延伸事件起促进作用。我们尝试了许多具有不同分子量和浓度的不同试剂,我们终于找到了符合我们要求的组合。

机缘

与其他科学研究相差无几,我们的成功是知情决策和机缘相互结合的产物。即使我们对重组系统了解甚多,我们也无法预料到拥挤试剂具有如此非凡的促进效果!在建立起扩增的架构后,我们致力于开发不同的检测模式,例如荧光团/淬灭团探针。

到 2006 年,我们准备发表关于 RPA 的第一篇论文,我们将注意力转向寻找可以让我们的技术充分发挥优势的应用。这是现阶段令我们兴奋的事情。RPA 现已成为快速、有效的 DNA 扩增技术,RPA 下一段历史将由我们与我们的客户一起抒写,他们将进一步挖掘 RPA 技术的其他绝妙应用。